1. যদি আমি হিমায়িত কোষের একটি টিউব পাই, তাহলে আমি কি সরাসরি তরল নাইট্রোজেনে সঞ্চয়ের জন্য রাখতে পারি?
অনেক ক্ষেত্রে, শুকনো বরফের (-80°C) উপর পরিবাহিত কোষগুলিকে আবার তরল নাইট্রোজেনে রাখা যায় এবং তারপর দ্রুত গলানো যায়।যাইহোক, এই ধরনের চিকিত্সার পরে কোষের কার্যক্ষমতা হ্রাস পেতে পারে।কিছু সংবেদনশীল সেল লাইনের জন্য, এটি কোষ পুনরুদ্ধারকে আরও কঠিন করে তুলতে পারে।তাপমাত্রা পরিবর্তনের ফলে কোষের মধ্যে বরফের স্ফটিকগুলির গঠনে পরিবর্তনের কারণে এই ঘটনাটি ঘটেছে বলে মনে করা হয়।তাই এটি সুপারিশ করা হয় যে প্রাপ্তির পরে যত তাড়াতাড়ি সম্ভব কোষগুলিকে গলানো এবং সংষ্কৃত করা উচিত।-80 ডিগ্রি সেলসিয়াসে স্টোরেজ সময় কমিয়ে দিন।এই তাপমাত্রা শুধুমাত্র পরিবহন জন্য ব্যবহার করা হয়.
2. পুনরুদ্ধারের জন্য তরল নাইট্রোজেন থেকে কোষ অপসারণের সময় কি নিরাপত্তা ব্যবস্থা গ্রহণ করা উচিত?
তরল নাইট্রোজেনের কোষের ক্রায়োটিউবগুলি যেগুলি সম্পূর্ণরূপে সীলমোহর করা হয় না এবং তাদের মধ্যে তরল নাইট্রোজেন লিক হয়ে যায়, যদি গলানোর সময় ক্রায়োটিউবের তাপমাত্রা তীব্রভাবে বৃদ্ধি পায় তবে বিস্ফোরণ ঘটাতে পারে।তাই তরল নাইট্রোজেন থেকে কোষ অপসারণের সময় গগলস এবং প্রতিরক্ষামূলক গ্লাভস পরার পরামর্শ দেওয়া হয়।পুনরুজ্জীবিত করার জন্য, ফ্রিজিং টিউবটিকে 37 ডিগ্রি সেলসিয়াস জলের স্নানে ক্রমাগত নাড়াতে হবে যাতে 1-2 মিনিটের মধ্যে হিমায়িত দ্রবণটি সম্পূর্ণভাবে গলাতে পারে।তারপরে, অ্যালকোহল ওয়াইপ দিয়ে টিউবের বাইরের অংশটি মুছুন, তারপরে এটিকে অতি-পরিষ্কার টেবিলে নিয়ে যান এবং কোষগুলিকে একটি সেন্ট্রিফিউজ টিউবে স্থানান্তর করুন যেখানে 10 মিলি কালচার মিডিয়াম যোগ করুন, 5-10 মিনিটের জন্য 1000 rpm-এ সেন্ট্রিফিউজ করুন, ফেলে দিন। সুপারনাট্যান্ট, উপযুক্ত পরিমাণে কালচার মিডিয়াম যোগ করুন এবং কালচার ফ্লাস্ক টিকা দিন এবং 5% CO2 ইনকিউবেটরে ইনকিউবেট করুন।
3. কোষগুলিকে তরল পর্যায়ের পরিবর্তে তরল নাইট্রোজেন ট্যাঙ্কের বাষ্প পর্যায়ে কেন সংরক্ষণ করা উচিত?
তরল নাইট্রোজেনের গ্যাস পর্যায়ে সঞ্চিত কোষগুলি পুনরুজ্জীবিত হওয়ার সম্ভাবনা বেশি।যেখানে তরল নাইট্রোজেনের তরল পর্যায়ে, যদি লাইওফিলাইজেশন টিউবগুলি সঠিকভাবে সিল করা না হয় বা ফুটো না থাকে, তবে কোষ এবং তরল নাইট্রোজেনের মধ্যে সরাসরি যোগাযোগ গলানোর পরে কোষগুলির কার্যক্ষমতার সাথে আপস করতে পারে।
4. সাসপেনশন কোষের জন্য, আমি কীভাবে সংস্কৃতির মাধ্যম পরিবর্তন করব?
সাসপেনশন কোষগুলিকে শুধুমাত্র তাজা মাধ্যম যোগ করে (স্থান অনুমতি দিলে) অথবা সেন্ট্রিফিউগেশন (5 মিনিটের জন্য 100 xg) দ্বারা কোষগুলিকে পুরানো মাধ্যম থেকে আলাদা করে এবং পরবর্তীকালে তাজা মাধ্যমে প্রিপিপিটেটেড কোষগুলিকে পুনরায় সাসপেন্ড করে করা যেতে পারে।যাইহোক, বেশিরভাগ সাসপেনশন সেল লাইনের জন্য, সহজভাবে মাধ্যম যোগ করা একটি ভাল পদ্ধতি।যেভাবেই হোক, কোষগুলি তাদের বৃহত্তম স্যাচুরেশন ঘনত্বে পৌঁছানোর আগে মাধ্যমটিকে পুনর্নবীকরণ করতে হবে।কোষের স্যাচুরেশন ঘনত্ব 3 x 10 5 এবং 2 x 10 6 এর মধ্যে পরিবর্তিত হয় সেল লাইন এবং সংস্কৃতির অবস্থার (বিশ্রাম বা আলোড়ন, অক্সিজেনেশন মাত্রা ইত্যাদি) উপর নির্ভর করে।কোষগুলিকে অবশ্যই কম কোষের ঘনত্বে পাতলা করতে হবে যাতে কোষগুলি লগারিদমিকভাবে বৃদ্ধি পেতে যথেষ্ট পুষ্টি পুনরুদ্ধার করতে পারে।কোষের ঘনত্ব না কমিয়ে যদি মাধ্যমটিকে সহজভাবে পরিবর্তন করা হয়, তাহলে কোষগুলি দ্রুত মাধ্যমটিকে নিঃশেষ করে মারা যাবে।যদি কোষগুলিকে তাদের ক্ষুদ্রতম ঘনত্বের নীচে মিশ্রিত করা হয়, তবে তারা একটি ল্যাগ পর্যায়ে প্রবেশ করবে এবং খুব ধীরে ধীরে বৃদ্ধি পাবে বা মারা যাবে।প্রতিটি সাসপেনশন সেল লাইনের আলাদা স্যাচুরেশন ডেনসিটি এবং প্যাসেজিং ব্যবধান থাকে, তাই দৈনিক সেল কাউন্ট হল সাসপেনশন সেল লাইনগুলি নিরীক্ষণ করার উপায়*।
5. কোষ সংস্কৃতির জন্য সুপারিশকৃত CO2 স্তর কী?
যদিও সেল কালচার সিস্টেমে CO2 এর মাত্রা 0.03% থেকে 40% পর্যন্ত (সাধারণত বায়ুমন্ডলে প্রায় 0.03% CO2), বাতাসে CO2 যোগ না হওয়া বা 5% থেকে 10% এর CO2 ঘনত্ব খুব সাধারণ।গ্যাস পর্যায়ে CO2 স্তরের সাথে ভারসাম্য বজায় রাখতে মিডিয়ামে সোডিয়াম বাইকার্বোনেটের ঘনত্ব সামঞ্জস্য করা গুরুত্বপূর্ণ।কোষ CO2 উত্পাদন করে এবং বৃদ্ধি এবং বেঁচে থাকার জন্য অল্প পরিমাণে কার্বনিক অ্যাসিড প্রয়োজন।যদি কোন CO2 যোগ করা না হয় এবং কোষগুলি গুণিত হয়, তাহলে 4 মিমি (0.34 গ্রাম/লি) অ্যানহাইড্রাস সোডিয়াম বাইকার্বোনেট ব্যবহার করা যেতে পারে।যাইহোক, এই সময়ে কালচার ফ্লাস্কের ঢাকনা শক্ত করে নিতে হবে।যদি কালচার সিস্টেমের জন্য 5% বা 10% CO2 প্রয়োজন হয়, তাহলে 23.5 mM (1.97 g/L) বা 47 mM (3.95 g/L) সোডিয়াম বাইকার্বোনেট যথাক্রমে 37°C তাপমাত্রায় ব্যবহার করুন, যার প্রাথমিক pH প্রায় 7.6।এই অবস্থার অধীনে, গ্যাসের ভারসাম্য বজায় রাখতে ফ্লাস্কটি খোলা রাখা উচিত বা একটি পেট্রি ডিশ ব্যবহার করা উচিত।
6. কেন কিছু কোষের সোডিয়াম পাইরুভেট প্রয়োজন?আমি কত সোডিয়াম পাইরুভেট মাধ্যম যোগ করা উচিত?
পাইরুভেট হল গ্লাইকোলাইটিক পাথওয়েতে একটি জৈব অ্যাসিড মেটাবোলাইট যা সহজেই কোষে প্রবেশ করে এবং ছেড়ে যায়।অতএব, মাধ্যমটিতে সোডিয়াম পাইরুভেট যোগ করা অ্যানাবোলিজমের জন্য একটি শক্তির উত্স এবং একটি কার্বন উত্স উভয়ই সরবরাহ করে, নির্দিষ্ট নির্দিষ্ট কোষগুলি বজায় রাখতে সহায়তা করে, কোষের ক্লোনিংয়ে সহায়তা করে বা মিডিয়ামটিতে সিরামের ঘনত্ব হ্রাস পেলে প্রয়োজন হয়।সোডিয়াম পাইরুভেট ফ্লুরোসেন্স-প্ররোচিত সাইটোটক্সিসিটি কমাতেও সাহায্য করে।সোডিয়াম পাইরুভেট সাধারণত 1 মিমি এর চূড়ান্ত ঘনত্বে যোগ করা হয়।বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ সোডিয়াম পাইরুভেট সলিউশন সাধারণত 100 মিমি স্টোরেজ সলিউশন (100X)।
www.DeepL.com/Translator (ফ্রি সংস্করণ) দিয়ে অনুবাদ করা হয়েছে।
পোস্টের সময়: জুন-২১-২০২২